আল্ট্রাফিল্ট্রেশন সেন্ট্রিফিউজ টিউবের ব্যবহার এবং সতর্কতা
1) একটি উপযুক্ত আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউব চয়ন করুন।উল্লেখ্য যে UF ঝিল্লি বিভিন্ন রাসায়নিকের সহনশীলতার মাত্রায় ভিন্ন।সাধারণত, 10 kDa আণবিক ওজন কাট-অফ সহ আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউবগুলি একটি আণবিক ওজন কাট-অফের সাথে নির্বাচন করা যেতে পারে যা আগ্রহের প্রোটিনের আণবিক ওজনের 1/3 এর বেশি হওয়া উচিত নয়, যেমন 35 kDa।যদি আগ্রহের প্রোটিনের আণবিক ওজন প্রায় 10 kd হয়, তাহলে 3 KD এর আণবিক ওজন কাট-অফ সহ একটি আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউব ব্যবহার করা যেতে পারে।
(2) আল্ট্রাফিল্ট্রেশন, সদ্য কেনা, শুষ্ক, ব্যবহার করার আগে অতি বিশুদ্ধ জল যোগ করা হয় এবং জল সম্পূর্ণরূপে ঝিল্লির মধ্য দিয়ে যায়, বরফ স্নান বা রেফ্রিজারেটর কয়েক মিনিটের জন্য ঠান্ডা হয়।তারপর জল ঢেলে দেওয়া হয়, অর্থাৎ প্রোটিন তরল, এবং কতটা যোগ করা হয়, যেটি টিউবের উপরের সাদা রেখার চেয়ে বেশি নয়।অপারেশনটি হালকা, এবং প্রোটিন দ্রবণ যোগ করার আগে আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউবটিকে বরফের উপর প্রি-কুল করা দরকার।
3) ভর এবং মাধ্যাকর্ষণ কেন্দ্র উভয়ই ভারসাম্যে পৌঁছাতে হবে।লক্ষ্য করুন ঘূর্ণন গতি এবং ত্বরণ খুব দ্রুত নয়, অন্যথায় সরাসরি আল্ট্রাফিল্ট্রেশন মেমব্রেনকে ক্ষতিগ্রস্ত করে।সেন্ট্রিফিউগাল আল্ট্রাফিল্ট্রেশন শুরু হয়েছিল (সেন্ট্রিফিউজ 4 ডিগ্রিতে প্রিকুলড)।বিভিন্ন সেন্ট্রিফিউজের RPM কে g তে রূপান্তরিত করার পরে, এটি ভিন্ন ছিল।সেন্ট্রিফিউজের ত্বরণ একটি ন্যূনতম সামঞ্জস্য করা হয়েছিল, ঝিল্লির উপর চাপ হ্রাস করে।দ্রষ্টব্য, সেন্ট্রিফিউজটি তার গন্তব্যের গতিতে পৌঁছে যাওয়ার পরে সেন্ট্রিফিউজটি ছেড়ে যেতে ভুলবেন না, বা আপনার যদি কোনও সমস্যা হয় তবে আপনি প্রথমবার এটি পরিচালনা করতে পারবেন না।টাকুতে ঝিল্লির স্থিতিবিন্যাস নির্দেশাবলী অনুসারে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল (কৌণিক সেন্ট্রিফিউজ কেস হল ঝিল্লি থেকে অক্ষ লম্ব)।ব্যবহারিক ব্যবহারে, সাধারণ ঘূর্ণন গতি নির্দেশাবলীর তুলনায় কম, যাতে সেন্ট্রিফিউজ টিউবের আয়ু বাড়ানো যায়।
3) ভর এবং মাধ্যাকর্ষণ কেন্দ্র উভয়ই ভারসাম্যে পৌঁছাতে হবে।লক্ষ্য করুন ঘূর্ণন গতি এবং ত্বরণ খুব দ্রুত নয়, অন্যথায় সরাসরি আল্ট্রাফিল্ট্রেশন মেমব্রেনকে ক্ষতিগ্রস্ত করে।সেন্ট্রিফিউগাল আল্ট্রাফিল্ট্রেশন শুরু হয়েছিল (সেন্ট্রিফিউজ 4 ডিগ্রিতে প্রিকুলড)।বিভিন্ন সেন্ট্রিফিউজের RPM কে g তে রূপান্তরিত করার পরে, এটি ভিন্ন ছিল।সেন্ট্রিফিউজের ত্বরণ একটি ন্যূনতম সামঞ্জস্য করা হয়েছিল, ঝিল্লির উপর চাপ হ্রাস করে।দ্রষ্টব্য, সেন্ট্রিফিউজটি তার গন্তব্যের গতিতে পৌঁছে যাওয়ার পরে সেন্ট্রিফিউজটি ছেড়ে যেতে ভুলবেন না, বা আপনার যদি কোনও সমস্যা হয় তবে আপনি প্রথমবার এটি পরিচালনা করতে পারবেন না।টাকুতে ঝিল্লির স্থিতিবিন্যাস নির্দেশাবলী অনুসারে সামঞ্জস্য করা হয়েছিল (কৌণিক সেন্ট্রিফিউজ কেস হল ঝিল্লি থেকে অক্ষ লম্ব)।ব্যবহারিক ব্যবহারে, সাধারণ ঘূর্ণন গতি নির্দেশাবলীর তুলনায় কম, যাতে সেন্ট্রিফিউজ টিউবের আয়ু বাড়ানো যায়।
(4) অবশিষ্ট 1ml-এ ঘনীভূত হলে, 50ul বাফার দ্রবণ নিন, 10ul এর মাধ্যমে প্রবাহ যোগ করুন এবং দেখুন যে কোনো নীল রঙ আছে কিনা, বিচার হিসাবে আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউব প্রোটিন অনুপস্থিত কিনা।যদি টিউবটি ফুটো হয়ে থাকে, তাহলে উপরের স্তরটি আবার ঢেলে দিন এবং আল্ট্রাফিল্ট্রেশন শুরু করতে একটি নতুন টিউবটিতে প্রবাহিত করুন।টিউব মিস হয়েছে কিনা তা সুনির্দিষ্টভাবে নির্ধারণ করতে, প্রবাহের আগে 5mgml BSA দিয়ে 10 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন, প্রোটিন আঠা বা ব্র্যাডফোর্ড ক্রুড অ্যাস দিয়ে চলুন এবং অবশিষ্ট ঘনীভূত প্রোটিন দ্রবণ যোগ করে চালিয়ে যান (যা বরফের উপর কাজ করে এবং প্রোটিনকে গরম হতে বাধা দেয়) সমস্ত ঘনত্ব যোগ করা হয়েছে।সেন্ট্রিফিউগেশনের সময় সাবধানতা অবলম্বন করুন যদি প্রোটিনের বৃষ্টিপাত ঘটে, যার ফলে টিউব বন্ধ হয়ে যায়।যদি বৃষ্টিপাত ঘটে, তাহলে নির্ধারণ করুন যে বৃষ্টিপাতের নির্দিষ্ট কারণ একটি অত্যধিক প্রোটিন ঘনত্ব বা একটি অনুপযুক্ত বাফার কিনা;আগেরটি একই সাথে একাধিক আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউবের আল্ট্রাফিল্ট্রেশনের মাধ্যমে, ঘনত্ব হ্রাস করে এবং পরবর্তীটি বিভিন্ন বাফার দ্রবণ বিনিময়ের মাধ্যমে সমাধান করা যেতে পারে যতক্ষণ না প্রোটিনের কোনো বৃষ্টিপাত না ঘটে।
(4) অবশিষ্ট 1ml-এ ঘনীভূত হলে, 50ul বাফার দ্রবণ নিন, 10ul এর মাধ্যমে প্রবাহ যোগ করুন এবং দেখুন যে কোনো নীল রঙ আছে কিনা, বিচার হিসাবে আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউব প্রোটিন অনুপস্থিত কিনা।যদি টিউবটি ফুটো হয়ে থাকে, তাহলে উপরের স্তরটি আবার ঢেলে দিন এবং আল্ট্রাফিল্ট্রেশন শুরু করতে একটি নতুন টিউবটিতে প্রবাহিত করুন।টিউব মিস হয়েছে কিনা তা সঠিকভাবে নির্ধারণ করতে, ফ্লোথ্রু হওয়ার আগে 5mgml BSA দিয়ে 10 মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করুন, প্রোটিন আঠা বা ব্র্যাডফোর্ড ক্রুড অ্যাস দিয়ে চলুন এবং অবশিষ্ট ঘনীভূত প্রোটিন দ্রবণ যোগ করে চালিয়ে যান (যা বরফের উপর কাজ করে এবং প্রোটিনকে গরম হতে বাধা দেয়) সমস্ত ঘনত্ব যোগ করা হয়েছে।সেন্ট্রিফিউগেশনের সময় সাবধানতা অবলম্বন করুন যদি প্রোটিনের বৃষ্টিপাত ঘটে, যার ফলে টিউব বন্ধ হয়ে যায়।যদি বৃষ্টিপাত ঘটে, তাহলে নির্ধারণ করুন যে বৃষ্টিপাতের নির্দিষ্ট কারণ একটি অত্যধিক প্রোটিন ঘনত্ব বা একটি অনুপযুক্ত বাফার কিনা;আগেরটি একই সাথে একাধিক আল্ট্রাফিল্ট্রেশন টিউবের আল্ট্রাফিল্ট্রেশনের মাধ্যমে, ঘনত্ব হ্রাস করে এবং পরবর্তীটি বিভিন্ন বাফার দ্রবণ বিনিময়ের মাধ্যমে সমাধান করা যেতে পারে যতক্ষণ না প্রোটিনের কোনো বৃষ্টিপাত না ঘটে।
(5) প্রোটিনকে ঘনীভূত করার জন্য প্রথম কয়েকটি ধাপ ব্যবহার করা হয়, এবং যদি বাফার পরিবর্তন করতে হয়, আলতো করে মোট প্রোটিনের প্রায় 1ml-এ নতুন বাফার (0.22um আল্ট্রাফিল্ট্রেশন মেমব্রেনের মাধ্যমে আল্ট্রাফিল্ট্রেশন) যোগ করুন এবং তিনটির জন্য প্রায় 1ml পুনঃসংযোগ করুন। পরপর বার, পছন্দসই প্রোটিন ঘনত্বের উপর নির্ভর করে চূড়ান্ত ঘনীভূত চূড়ান্ত ভলিউম সহ, সাধারণত 500ul এর বেশি নয়, তবে 200ul এর মধ্যেও।তিনটি অনুষ্ঠানে 1000 × বা তার বেশি অর্জন করুন, মূলত যতটা বাফার পরিবর্তন, প্রতিবার কমপক্ষে 10 × বা তার বেশি ভলিউম সমৃদ্ধকরণ দ্বারা গণনা করা হয়।
(5) প্রোটিনকে ঘনীভূত করার জন্য প্রথম কয়েকটি ধাপ ব্যবহার করা হয়, এবং যদি বাফার পরিবর্তন করতে হয়, আলতো করে মোট প্রোটিনের প্রায় 1ml-এ নতুন বাফার (0.22um আল্ট্রাফিল্ট্রেশন মেমব্রেনের মাধ্যমে আল্ট্রাফিল্ট্রেশন) যোগ করুন এবং তিনটির জন্য প্রায় 1ml পুনঃসংযোগ করুন। পরপর বার, পছন্দসই প্রোটিন ঘনত্বের উপর নির্ভর করে চূড়ান্ত ঘনীভূত চূড়ান্ত ভলিউম সহ, সাধারণত 500ul এর বেশি নয়, তবে 200ul এর মধ্যেও।তিনটি অনুষ্ঠানে 1000 × বা তার বেশি অর্জন করুন, মূলত যতটা বাফার পরিবর্তন, প্রতিবার কমপক্ষে 10 × বা তার বেশি ভলিউম সমৃদ্ধকরণ দ্বারা গণনা করা হয়।
পোস্টের সময়: নভেম্বর-০৯-২০২২